期刊刊名：科學與工程技術期刊 　 卷期：16卷1期

篇名出版日期：2020年3月1日

作者：吳芳禎,李建德,施英隆

語言：Chinese

關鍵字：ε-聚離胺酸,聚離胺酸降解酵素,放線菌白色鏈球菌,酵素純化,離子交換層析,外切型酵素,ε-Poly-lysine,ε-PL-degrading enzyme, Streptomyces albulus, enzyme purification, ion exchange chromatography, exo-type degradation

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摘要：
ε-聚離胺酸（ε-Poly-lysine;ε-PL）是由微生物發酵生產的天然生物性材料。ε-PL之應用潛力廣，然而生合成作用機制還未明，調控機制則仍十分模糊。ε-PL合成酵素（PL synthetase; PLS）與ε-PL降解酵素（PL degrading enzyme; PLD）與ε-PL之生產有密切關係，除可影響其分子量外亦為探討ε-PL之生合成機制之一重要工具，本研究先行探討ε-PL降解酵素之分離純化。本研究已完成篩選一株具有能忍受ε-PL之菌株且具ε-PL合成與ε-PL降解能力之菌株Streptomyces albulus PLT1。 S. albulus PLT1可使用葡萄糖或甘油為碳源並能生產ε-PL，是為ε-PL之生產菌。在含葡萄糖之M3G培養基中經72h 培養可得0.561g/L之ε-PL，但在含甘油之M3G培養基中經72h 培養可得0.385g/L之ε-PL。S. albulus PLT1之ε-PL之合成酵素活性以附著細胞膜部份最為顯著（0.13±0.02 U/mg protein） ，其他去菌之培養液，細胞質部份酵素活性相當低，因此應是膜結合蛋白。S. albulus PLT1之ε-PL之分解酵素活性以附著細胞膜部份最為顯著（0.066±0.002 U/mg protein），其他去菌之培養液，細胞質部份酵素活性相當低，因此亦應是膜結合蛋白。在分解ε-PL實驗，經30分鐘反應後部份ε-PL已分解，新產物為L-lys，而無其他多元之較小分子量之ε-PL，因此S. albulus PLT1之ε-PL分解酵素應是外切型酵素型態。ε-PL分解酵素（PLD）之分離純化可經過DEAE-Sepharose、Source 15Q陰離子交換層析後得到純化之酵素，最後之純化倍數為65.6，回收率為25.5%，比活性達40.0 U/mg。將純化的樣品進行SDS−PAGE 電泳分析，樣品之電泳分析呈現一主帶，對照標準品分子量，計算得ε-PL分解酵素分子量約為39.5 kDa。

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